胶原酶II型（Collagenase, Type II）是一种具有独特的消化天然胶原和变性胶原能力。去污剂、六氯环己烷和重金属离子可降低酶活性。专一作用于原胶原，使其断裂进而被其他蛋白酶水解，不水解纤维蛋白，球蛋白。本产品来源于溶组织梭菌，为透析后的冻干粉末。

别名：Collagenase,Type 2；Clostridiopeptidase A；梭菌肽酶 A

物理性状及指标

外观：………………………………………棕褐色或淡褐色粉末

溶解性：……………………………………TESCA buffer: soluble 1~2mg/mL at 37℃

units/mg Solid (Collagen) ：………………≥125CDU/mg

units/mg Solid (Caseinase)：……………≥200

units/mg Solid (Clostripain)：……………≥3.5

units/mg Solid (Tryptic)：……………….…≥0.1

注：TESCA buffe-50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4

酶活定义（胶原蛋白）

一个单位是指在37℃、pH值为7.5的条件下，5小时内能够从胶原蛋白中释放出相当于1微摩尔L-亮氨酸的肽段。

储存条件：-20℃保存，避光防潮密闭干燥

运输条件：湿冰运输（按季节）

用途及描述：科研试剂，仅限应用于分子生物学、药理学等科研方面，严禁用于人体。

胶原酶II型可用于：

用于骨骼、心脏、肝脏、甲状腺和唾液腺细胞的原代分离；

用于研究高级糖基化终产物（AGE）的动脉组织；

与其他蛋白酶一起用于解剖人类肿瘤，小鼠肾脏，人脑，肺上皮和许多其他组织；

在肝脏和肾脏灌注研究，胰腺消化和非实质肝细胞的分离；

用于从大鼠肝脏制备活肝细胞和从大鼠脂肪组织中分离脂肪细胞。

生物活性

每摩尔的胶原酶可以被4g钙原子激活。它被乙二醇双(β-氨基乙醚)- N, N, N, N -四乙酸、β-巯基乙醇、谷胱甘肽，巯基乙酸和8-羟基喹啉所抑制。胶原酶和中性蛋白酶在从组织中进行细胞的有效释放中起到重要作用。胶原酶识别序列-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-，其中X通常是中性氨基酸。

使用方法

储存液的配制，用于细胞培养相关实验：按照基本信息表格中溶解性进行溶解，如用于细胞实验，请配制成液体之后用0.22μm过滤后再加入细胞。

储存液的保存：建议现配现用，液体不是很稳定；也可分装成单次用量，2年稳定。避免反复冻融。

使用浓度：用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5~2.5mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1~2mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。

组织分离

（1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3~4mm大小的组织块；

（2）利用含Ca2+、Mg2+的Hank’s平衡盐溶液（HBSS）洗涤组织块数次；

（3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；

（4）于37℃孵育4~18h。消化时使用水平摇床以及用3mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。

（5）已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；

（6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

（7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

（8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。